Сведения о ходе выполнения 2 этапа проекта №14.575.21.0151 от 26.09.2017 года

В ходе выполнения проекта: «Разработка основ новых технологий получения белков и пептидов с использованием молекулярных шаперонов для медицины и переработки сельскохозяйственной продукции» по Соглашению о предоставлении субсидии от 26 сентября 2017 года № 14.575.21.0151 с Минобрнауки России в рамках федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2014-2020 годы» на этапе № 2 в период с 01 января по 31 декабря 2018 года выполнялись следующие работы:

1. Разработан, получен, проанализирован оптимизированный молекулярный конструкт шаперона для создания слитых белков с целью биосинтетического получения целевых полипептидов.

2. Оптимизировано высокоэффективное биосинтетическое получение рекомбинантных полипептидов и методов разделения слитых белков для получения целевых пептидов и белков.

3. Разработан базовый процесс очистки (выделения) рекомбинантных пептидов и белков.

4. Проведен мониторинг критических точек процесса биосинтетического получения целевого антибактериального пептида.

5. Осуществлен контроль качества целевого антибактериального пептида.

6. Разработан лабораторный регламент биосинтетического получения целевого антибактериального пептида.

7. Разработан, получен, проанализирован молекулярный конструкт на основе шаперона для получения гидрофобных белков в растворимых формах для целей медицины.

8. Разработан и получен молекулярный конструкт на основе шаперона или его фрагмента с выбранным целевым гидрофобным полипептидом.

9. Разработана программа и методики исследовательских испытаний экспериментального образца молекулярного конструкта на основе шаперона для целей медицины, в том числе – программа исследования острой и хронической токсичности конструкта на основе шаперона для целей медицины в соответствии с ГОСТ 1.5.339-2.026.13 и Руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Арзамасцев Е. В. и др. – 2012.

10. Разработана программа и методики исследовательских испытаний экспериментального образца антибактериального пептида.

11. Проведен мониторинг критических точек процесса получения молекулярного конструкта на основе шаперона для целей медицины.

12. Разработан лабораторный регламент биосинтетического получения молекулярного конструкта на основе шаперона для целей медицины.

13. Осуществлен контроль качества молекулярного конструкта на основе шаперона для целей медицины.

14. Проведена наработка конструкта шаперона с целевым антибактериальным пептидом.

15. Осуществлено ресурсное обеспечение выполнения работ этапа (покупка и/или аренда научно-исследовательского оборудования, амортизация используемого оборудования, дооснащение участка для прототипирования, при необходимости расширение используемых площадей за счет аренды дополнительных помещений. Первый отчетный период).

16. Отработан опытный процесс получения рекомбинантных пептидов на основе шаперонов.

17. Проведена наработка конструкта на основе шаперона для целей медицины.

18. Осуществлено ресурсное обеспечение выполнения работ этапа (покупка и/или аренда научно-исследовательского оборудования, амортизация используемого оборудования, дооснащение участка для прототипирования, при необходимости расширение используемых площадей за счет аренды дополнительных помещений. Второй отчетный период).

При этом были получены следующие результаты:

- Проведены теоретические и экспериментальные исследования биосинтеза пептидов в составе слитых белков на основе шаперонов. Полученный в ходе первого этапа молекулярный конструкт для биосинтетического получения пептидов был оптимизирован с целью упрощения очистки получаемого в ходе гидролиза пептида. Оптимизированный конструкт сохранил отличительные особенности исходного конструкта. Были оптимизированы методики получения и очистки конструкта. На основе полученных данных был разработан лабораторный регламент.

- Был проведен дополнительный патентный поиск с учетом новейших результатов. Показана научная новизна и потенциальная патентуемость полученных технологий, поданы две заявки на патенты и создан один РИД.

- Была наработана опытная партия биосентического пептида.  Получен образец 95% чистоты, подлинность образца подтверждена масс-спектрометрией. Наработка производилась согласно регламенту, контроль критических точек был проведен согласно методикам, разработанным в ходе первого этапа. Проведена отработка опытного процесса получения рекомбинантных пептидов на основе шаперонов, стадия гидролиза укорочена с 18 часов до 3 и увеличен выход на 4%.

- Проведены работы по изучению возможности использования шаперонов в качестве носителей гидрофобных белков в растворимых формах для целей медицины. Был сконструирован модельный объект, содержащий высоко гидрофобный полипептид с потенциальной ценностью для медицинских исследований. Конструкт на основе шаперона, показавший возможность стабилизации гидрофобных полипептидов был очищен, была изучена его стабильность. Был разработан лабораторный регламент получения данного конструкта и проведена наработка опытного образца согласно регламенту. Полученный образец показал чистоту более 98 % и содержание эндотоксинов менее 3000 еЭ/мл. В ходе наработки был проведен мониторинг критических точек процесса.

- Было изучено качество полученных опытных образцов биосинтетического пептида и конструкта на основе шаперона для целей медицины и разработаны программы дальнейшего исследования их свойств, в том числе – токсикологических исследований конструкта на основе шаперона.

Комиссия Минобрнауки России признала обязательства по Соглашению на отчетном этапе исполненными надлежащим образом.